PCR實(shí)驗室是所有的實(shí)驗室種類(lèi)中,對區域劃分與環(huán)境潔凈度的要求非常高的實(shí)驗室之一。要保證PCR實(shí)驗室的成功建設就要遵守各個(gè)環(huán)節各個(gè)細節的設計原則。下面針對各個(gè)環(huán)節的設計,來(lái)簡(jiǎn)析一下PCR實(shí)驗室的裝修要點(diǎn)。
一、PCR實(shí)驗室裝修知識
這里著(zhù)重介紹PCR實(shí)驗室裝修的功能區劃分,建議從3方面來(lái)考慮,即:普通實(shí)驗區、污染控制區、氣流組織。
1.普通實(shí)驗區:包括產(chǎn)物分析區、擴增區、標本制備區、試劑準備區這4個(gè)區域。
2.污染控制區:此區域的規劃有3套方案,第1套為各功能間相互串通,以套間方式進(jìn)入人流/物流;第2套為設置獨立緩沖間,人流/物流分道,流程相鄰間設置物流傳遞窗;第3套為設置共用緩沖間/緩沖走廊。
3.氣流組織:PCR實(shí)驗室裝修的氣流組織需要從原始試劑混配室、DNA提取室、PCR擴增室、檢測室、送風(fēng)口這5方面來(lái)考慮。
①原始試劑混配室:房間壓差為正壓,配備有潔凈工作臺,以防止其他功能間對本房間的污染。
②DNA提取室:房間壓差為負壓,配備有排風(fēng)系統,以防止提取核酸產(chǎn)生的氣溶膠對工作人員的傷害及擴散污染。
③PCR擴增室:房間壓差為負壓,與DNA提取室一樣,配備有排風(fēng)系統,以防止擴增產(chǎn)物造成的擴散污染。
④檢測室:房間壓差為負壓,與DNA提取室、PCR擴增室一樣,配備有排風(fēng)系統,以防止相關(guān)污染。
⑤送風(fēng)口:采用的是頂送風(fēng),側下回/排風(fēng)方式。
二、PCR實(shí)驗室設計知識
這里著(zhù)重介紹PCR走廊、傳遞窗這2方面的最新知識。
1.PCR走廊:并不是標配,進(jìn)深不夠時(shí)不要做PCR走廊,且PCR走廊會(huì )增加交叉污染。
這4個(gè)分區(試劑儲存和準備區、標本制備區、核算擴增區、產(chǎn)物分析區)原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨立的,各區域無(wú)論在空間上還是在使用中,應當始終處于完全的分隔狀態(tài),不能有空氣的直接相通。
2.傳遞窗:并非必須設置(只要不涉及潔/污分流就不需要設置傳遞窗),但一般實(shí)驗機構/實(shí)驗人員都設置。
傳遞窗的本質(zhì)——同緩沖間,是物流的緩沖間。在PCR實(shí)驗室設計中,試劑準備和標本制備間是重點(diǎn)保護的區域,此處也可以不要傳遞窗,防止交叉污染。實(shí)驗中的污染風(fēng)險主要來(lái)自于核酸擴增時(shí)的加樣行為,但由于操作在生物安全柜內進(jìn)行,且確??諝獠煌庖?,因此不存在污染。
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